鬼峰是液相色譜中最常出現(xiàn)的問(wèn)題之一，鬼峰來(lái)源多種多樣，理論上講，在HPLC系統(tǒng)中任何一個(gè)節(jié)點(diǎn)均有可能引入鬼峰，依據(jù)鬼峰出現(xiàn)的頻率，其主要來(lái)源于溶劑問(wèn)題，儀器問(wèn)題、流動(dòng)相殘留氣泡以及操作不當(dāng)?shù)取?/span>
讓我們主要從以下幾種情況分析鬼峰出現(xiàn)的原因
甲醇制備工藝相對(duì)乙腈來(lái)說(shuō)較為簡(jiǎn)單，雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，尤其是波長(zhǎng)較低時(shí)，盡量使用乙腈作為有機(jī)相，用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高，一般用進(jìn)口梯度色譜專用乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現(xiàn)。 另外如果有機(jī)相使用完后未更換新的流動(dòng)相瓶，而是采用直接添加補(bǔ)充的方式也有可能會(huì)產(chǎn)出鬼峰。
很多單位用自制蒸餾水作為水相，但是結(jié)果并不是很好。原因就是一些低沸點(diǎn)的有機(jī)雜質(zhì)并不能夠通過(guò)蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級(jí)的純水，沒(méi)有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色譜條件比較嚴(yán)格也是有可能出問(wèn)題的。 此外，水相要現(xiàn)配現(xiàn)用，避免微生物滋長(zhǎng)。
緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會(huì)對(duì)流動(dòng)相造成很大的影響，盡量用純度高的試劑配制流動(dòng)相。
長(zhǎng)時(shí)間的使用含水量較高的流動(dòng)相（尤其是加入緩沖鹽的），細(xì)菌就容易在管路中滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片能造成鬼峰。
多為一些樣品組分在檢測(cè)器流通池內(nèi)的殘留，其特點(diǎn)具有先后針之間的重復(fù)性差，或者沒(méi)有重復(fù)性，色譜峰峰形特別尖銳類似大的毛刺。該種情形下，需要對(duì)流通池特別是石英視窗進(jìn)行徹底清洗(聯(lián)系工程師或者嚴(yán)格按照manual進(jìn)行)
造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動(dòng)相，現(xiàn)在應(yīng)該已經(jīng)得到改進(jìn)。
色譜柱可對(duì)流動(dòng)相或系統(tǒng)流路內(nèi)的強(qiáng)保留污染組分起到富集作用，在有機(jī)相比例隨梯度程序變化的過(guò)程中而被沖洗出來(lái)。在使用較長(zhǎng)的色譜柱的時(shí)候尤其值得關(guān)注，因此，在水相不確定是否有雜質(zhì)存在的條件下，梯度運(yùn)行后的再平衡時(shí)間盡可能的短，一般以10倍柱體積為宜。
保留時(shí)間一般不可重現(xiàn)，即使流路中氣泡連續(xù)存在，鬼峰出現(xiàn)的位置亦不可預(yù)測(cè)。可將流動(dòng)相超聲或鼓He脫除氣泡并打開(kāi)purge閥，大流速?zèng)_出儀器管路中的氣泡，來(lái)減少氣泡引起的鬼峰現(xiàn)象。
b. 兩種流動(dòng)相的有機(jī)相比例相差太大 例如A為100%水，B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動(dòng)相之間的差距，降低空氣在兩中流動(dòng)相中溶解度的差異，從而減少氣泡的產(chǎn)生。
c. 流動(dòng)相配置好后預(yù)先超聲脫氣
a. 流動(dòng)相配置過(guò)程中受到污染 盛放流動(dòng)相的容器或是樣品瓶受到污染：這種污染可能來(lái)自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實(shí)驗(yàn)人員用完后的殘留雜質(zhì)。流動(dòng)相容器的清洗一般用干凈的水+有機(jī)溶劑涮洗就行，過(guò)多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時(shí)流動(dòng)相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來(lái)源。對(duì)于樣品瓶污染情況下的鬼峰，容易排除，僅需要分別將樣品溶解或稀釋用的試劑以及進(jìn)樣小瓶更換，即可確定鬼峰的來(lái)源。pH計(jì)：很多pH計(jì)以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機(jī)溶劑的，所以盡量使用玻璃pH計(jì)來(lái)測(cè)量流動(dòng)相的pH。濾膜：劣質(zhì)的或者型號(hào)錯(cuò)誤的濾膜往往是鬼峰出現(xiàn)的原因。放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：流動(dòng)相在空氣中暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，就可能吸收空氣中的有機(jī)雜質(zhì)，有時(shí)流動(dòng)相中的添加劑，例如TFA，時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。由自動(dòng)進(jìn)樣器引入的鬼峰：自動(dòng)進(jìn)樣器在進(jìn)樣之后，部分樣品溶液殘留在進(jìn)樣針頭以及針座之上，對(duì)下次進(jìn)樣別的樣品的結(jié)果產(chǎn)生干擾，出現(xiàn)鬼峰。對(duì)于一些強(qiáng)吸附性組分，盡管進(jìn)行程序洗針，有時(shí)依然可能會(huì)引入鬼峰。針對(duì)這種情形，可在儀器平衡之后，分別進(jìn)樣不同試劑的Blank以及不進(jìn)樣，比較得到的圖譜，基本可確定鬼峰是否來(lái)源于進(jìn)樣過(guò)程。
b. 樣品稀釋液與流動(dòng)相極性或者pH相差太大 這也是導(dǎo)致鬼峰的原因之一，這種問(wèn)題很有可能導(dǎo)致樣品分為兩個(gè)不同的階段出峰，從而產(chǎn)生雙峰或者多峰。
鬼峰對(duì)于反相液相色譜來(lái)說(shuō)，是經(jīng)常遇到的問(wèn)題，對(duì)分析方法造成干擾并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。從上面的討論可以看出，盡管鬼峰的來(lái)源多種多樣，基本應(yīng)對(duì)原則就是，找到鬼峰的來(lái)源，更換流動(dòng)相或更換添加劑或?qū)x器被污染部分進(jìn)行清洗，在實(shí)驗(yàn)中避免不正確的操作。
